Tes TPHA merupakan tes hemaglutinasi pasif berdasarkan hemaglutinasi eritrosit yang disensitisasi dengan antigen T. pallidum oleh antibodi yang ditemukan dalam serum atau plasma pasien. Ini digunakan untuk deteksi kualitatif dan semi-kuantitatif antibodi anti-treponema.

https://hellosehat.com/

Prinsip Tes TPHA

Sampel uji diencerkan dalam pengencer penyerap untuk menghilangkan kemungkinan antibodi heterofil yang bereaksi silang dan untuk menghilangkan, memblokir, atau menyerap antibodi treponema nonpatogenik yang berpotensi bereaksi silang.

Sera yang mengandung antibodi terhadap T. pallidum bereaksi dengan eritrosit (ayam atau unggas) yang disensitisasi dengan T. pallidum yang disonikasi dan strain Nichols (antigen) untuk membentuk lapisan halus sel yang diaglutinasi di dalam sumur mikrotiter.

Interpretasi hasil tes TPHA jika antibodi tidak ada, sel-sel mengendap di dasar baki dengan baik, membentuk tombol kompak dari sel-sel yang tidak teraglutinasi.

Reagen untuk tes TPHA

Berikut ini adalah Reagen yang digunakan dalam tes TPHA. Reagen tersebut biasanya sudah tersedia dalam bentuk kit oleh produsen:

– Suspensi sel uji

Sel darah merah yang diawetkan diperlakukan dengan asam tanat dan dilapisi dengan antigen T. pallidum.

– Suspensi sel kontrol

Sel darah merah yang diawetkan (tanpa antigen T. pallidum yang diimobilisasi).

– Buffer

Larutan garam buffer fosfat yang mengandung penyerap (digunakan untuk menghilangkan kemungkinan antibodi heterofil yang bereaksi silang).

– Serum kontrol positif

Serum manusia yang mengandung antibodi terhadap T. pallidum. Siap untuk digunakan dan akan memberikan titer setara 1/640 hingga 1/2560 dengan uji kuantitatif.

– Serum kontrol negatif

Serum manusia yang bebas dari antibodi terhadap T. pallidum

Prosedur tes TPHA

Sebelum melakukan prosedur pengujian, bawa sampel, pengencer, kontrol, dan sel uji pada suhu kamar (25 – 30ºC). Untuk setiap tes kualitatif, plat tes dengan tiga sumur diperlukan.

Pengenceran sampel serum

• Tambahkan 10μL serum pasien pada sumur pertama (sumur A)
• Tambahkan 190 μL pengencer (disediakan produsen)
• Campurkan isi sumuran menggunakan mikropipet, serum yang telah dilarutkan ini akan digunakan nanti.

Pengujian sampel serum untuk mengetahui adanya antibodi spesifik

• Tambahkan 75μL suspensi sel kontrol ke dalam sumur B dan tambahkan 75μL suspensi sel uji ke sumur C.
• Tambahkan 25μL serum yang telah dilarutkan sebelumnya ke dalam sumur B dan C.
• Goyangkan plat dengan lembut untuk mencampurkan isinya.
• Tutup plat dan lindungi dari sinar matahari langsung, panas, atau sumber getaran.
• Inkubasi selama 45-60 menit pada temperatur ruang.
• Baca hasil tes dan interpretasikan
• Kontrol positif dan negatif dapat digunakan sepanjang tes dengan tes serum.

Interpretasi hasil tes TPHA

Hasil tes TPHA

– Sangat reaktif

Sel uji : pola sel penuh menutupi dasar sumur, sel kontrol : tidak ada tombol tebal aglutinasi.

– Reaktif lemah

Sel uji : pola sel menutupi sekitar 1/3 dari dasar sumur, sel kontrol : tidak ada tombol tebal aglutinasi.

– Tak tentu (equivocal)

Sel uji : pola sel menunjukkan pusat terbuka yang jelas, sel kontrol: tidak ada tombol tebal aglutinasi.

– Nonreakrif

Sel uji : sel menetap di dasar yang padat, biasanya dengan pusat kecil yang jelas, sel kontrol : tidak ada tombol tebal aglutinasi.

Interpretasi tes TPHA

– Reaktif (R)

Hasil reaktif dapat menunjukkan infeksi aktif, masa lalu, atau berhasil diobati. Diagnosis harus dibuat dengan anamnesis yang cermat dari pasien dan pemeriksaan fisik serta hasil laboratorium yang relevan.

– Tak tentu

Hasil tak tentu dikonfirmasi dengan tes uji MHATP dan FTA-ABS.

– Hasil positif palsu

Meskipun tes TPHA sangat spesifik, hasil positif palsu telah diketahui terjadi pada pasien yang menderita kusta, mononukleosis menular, dan gangguan jaringan ikat. Untuk konfirmasi, tes FTA-ABS harus digunakan.

Itulah informasi mengenai interpretasi hasil tes TPHA. Kit tes FOKUS TPHA lengkap dengan reagennya tersedia di Syaf Unica Indonesia.