Uji widal dilakukan dengan dua metode, yaitu metode aglutinasi slide cepat dan metode aglutinasi tabung. Aglutinasi slide dapat berupa tes kualitatif atau kuantitatif. Metode tabung lebih sensitif dan akurat, tetapi metode aglutinasi slide banyak digunakan.

https://fokusdiagnostic…com

Persiapan tes antigen widal

Antigen dapat disiapkan di laboratorium menggunakan kultur murni Salmonella Typhi dan Paratyphi A dan B. Namun, kit yang tersedia secara komersial digunakan di sebagian besar laboratorium.

• Siapkan H-antigen semalaman kultur kaldu Salmonelladiperlakukan dengan larutan formalin 0,1%
• Siapkan antigen-O, Salmonella yang baru tumbuh pada agar fenol diemulsikan dalam volume kecil normal. Sebanyak 1 ml suspensi dicampur dengan 20 ml etanol (absolut) dan dipanaskan pada 400 sampai 500 C dan disentrifugasi.
• Antigen diperlakukan dengan pengawet (kloroform) dan diwarnai dengan pewarna yang sesuai.

Jenis prosedur tes widal

Tes cepat aglutinasi slide

Tes ini dilakukan pada kartu tes Widal. Ini adalah tes yang paling banyak dilakukan dan terdiri dari dua jenis, yaitu;

Tes slide kualitatif

Tes ini dilakukan untuk mendeteksi ada tidaknya antigen Salmonella penyebab demam enterik. Ini adalah metode yang sederhana dan cepat, tetapi kami tidak dapat mengukur tingkat antigen. Ini dilakukan dalam langkah-langkah berikut:

• Tempatkan setetes serum sampel di setiap lingkaran reaksi kartu uji Widal berlabel O, H, AH, dan BH.
• Tempatkan setetes reagen kontrol positif dalam lingkaran reaksi berlabel PC.
• Tempatkan setetes reagen kontrol negatif dalam lingkaran reaksi berlabel NC.
• Tambahkan satu tetes larutan antigen H dari test kit Widal di atas kontrol positif dan kontrol negatif.
• Tambahkan setetes masing-masing larutan antigen O, H, AH, dan BH pada serum sampel pada lingkaran reaksi masing-masing.
• Campur larutan serum dan antigen di setiap lingkaran reaksi secara merata menggunakan aplikator stick.
• Goyangkan slide dengan lembut untuk memutar campuran reaksi dalam gerakan melingkar di dalam lingkaran reaksi.
• Amati adanya aglutinasi makroskopik dalam satu menit.
• Goyangkan slide dengan lembut untuk memutar campuran reaksi dalam gerakan melingkar di dalam lingkaran reaksi.
• Amati adanya aglutinasi makroskopik dalam satu menit.

Tes slide kuantitatif (semi-kuantitatif)

Jenis prosedur tes widal ini dilakukan untuk mengukur tingkat antigen yang ada dalam sampel serum. Ini hanya dilakukan jika uji kualitatifnya positif. Ini dilakukan dalam langkah-langkah berikut:

• Tempatkan setetes garam normal ke dalam lingkaran reaksi pertama.
• Tempatkan 5, 10, 20, 40, dan 80 μl sampel uji (serum) masing-masing di lingkaran reaksi yang tersisa.
• Tambahkan setetes suspensi antigen yang menunjukkan uji positif (yaitu aglutinasi) pada uji kualitatif di setiap lingkaran reaksi.
• Campur isinya secara merata menggunakan stik aplikator.
• Goyangkan slide dengan lembut untuk memutar campuran reaksi dalam gerakan melingkar di dalam lingkaran reaksi.
• Amati adanya aglutinasi makroskopik dalam satu menit.

Uji aglutinasi tabung (uji tabung kuantitatif)

Jenis prosedur tes widal ini dilakukan dalam tabung kaca. Berbagai jenis tabung awalnya digunakan seperti tabung Dreyer untuk antigen H dan tabung Felix untuk antigen O.

Dalam metode uji modern, tabung Kahn atau tabung reaksi sederhana digunakan secara luas. Tes ini mendeteksi keberadaan antibodi serta mengukur titer antibodi. Tes dilakukan dalam langkah-langkah berikut:

• Susun 4 set Tabung Khan kering bersih setiap set dengan 8 tabung berlabel 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, dan 8.
• Tambahkan 1,9 ml larutan garam steril isotonik (0,85%) ke dalam tabung 1 masing-masing set
• Tambahkan 1,0 ml salin steril isotonik ke dalam tabung yang tersisa (2 – 8) dari setiap set.
• Tambahkan 0,1 ml sampel serum ke dalam tabung 1 masing-masing set dan aduk rata.
• Dari tabung 1 setiap set, pindahkan 1,0 ml serum yang diencerkan ke setiap tabung 2 set masing-masing.
• Dari tabung 2 masing-masing set, pindahkan 1,0 ml serum yang diencerkan ke setiap tabung 3 set masing-masing.
• Lanjutkan proses pengenceran serial ini hingga tabung 7 setiap set. Dari tabung 7 masing-masing set, buang 1,0 ml pengenceran. (Jangan pindahkan ke tabung 8).
• Tambahkan 1 tetes antigen Widal-O pada setiap tabung set 1, 1 tetes antigen Widal-H pada setiap tabung set 2, 1 tetes antigen Widal-AH pada setiap tabung set 3, dan 1 tetes antigen Widal- BH di setiap tabung set 4.
• Campurkan campuran reaksi dengan benar, tutup tabung dan inkubasi pada suhu 370C selama sekitar 18 jam (semalam)
• Setelah inkubasi, cari aglutinasi di bagian bawah tabung.

Itulah beberapa jenis prosedur tes widal yang perlu diketahui. Syaf menyediakan FOKUS Febrile Antigen O-D Paratiphy.

Website || Syaf.co.id