Teknik sentrifugasi untuk memisahkan partikel ada dua yaitu sentrifugasi diferensial dan sentrifugasi gradien densitas. Sentrifugasi gradien densitas selanjutnya dapat dibagi menjadi sentrifugasi zona-laju dan isopiknik. Simak informasi mengenai teknik sentrifugasi dan kegunaannya berikut ini.

https://www.sigma-zentrifugen.de/

SENTRIFUGASI DIFERENSIAL

Sentrifugasi diferensial merupakan bentuk paling sederhana dari pemisahan. Sentrifugasi diferensial kadang-kadang disebut pelet diferensial. Pada sentrifugasi ini, partikel dengan densitas atau ukuran yang berbeda dalam suspensi akan mengendap pada kecepatan yang berbeda. Partikel yang lebih besar dan lebih padat akan mengendap lebih cepat diikuti oleh partikel yang kurang padat dan lebih kecil.

Laju sedimentasi ini dapat ditingkatkan dengan menggunakan gaya sentrifugal. Serangkaian pelet yang mengandung sel dengan laju sedimentasi yang menurun akan dihasilkan dari suspense gel yang mengalami serangkaian siklus gaya sentrifugal yang meningkat.

Biasanya pellet diferensial digunakan untuk memanen sel atau memproduksi fraksi subseluler kasar dari homogenat jaringan. Misalnya, homogenat hati tikus yang mengandung inti, mitokondria, lisosom, dan vesikel membran yang disentrifugasi dengan kecepatan rendah untuk waktu yang singkat akan menghasilkan pelet terutama inti yang lebih besar dan lebih padat.

Sentrifugasi berikutnya pada gaya sentrifugal yang lebih tinggi akan menghasilkan partikel dengan ukuran yang lebih rendah (misalnya mitokondria) dan seterusnya. Hal ini tidak biasa untuk menggunakan lebih dari empat siklus sentrifugasi diferensial untuk homogenat jaringan normal.

Sentrifugasi diferensial memiliki kontaminasi dan pemulihan yang buruk karena homogenitas dalam partikel biologis. Kontaminasi oleh jenis partikel yang berbeda dapat diatasi dengan resuspensi dan mengulangi langkah sentrifugasi (mencuci pelet).

SENTRIFUGASI GRADIEN DENSITAS

Sentrifugasi rate-zonal

Dalam sentrifugasi zona-laju atau rate-zonal, masalah kontaminasi silang partikel dengan laju sedimentasi yang berbeda dapat dihindari dengan melapisi sampel sebagai zona sempit di atas gradien densitas.  Sehingga partikel yang mengendap lebih cepat tidak terkontaminasi oleh partikel yang lebih lambat.

Namun, zona beban yang sempit membatasi volume sampel yang dapat diakomodasi pada gradien densitas biasanya 10%. Gradien menstabilkan pita dan menyediakan media untuk meningkatkan densitas dan viskositas.

Kecepatan di mana partikel mengendap tergantung pada ukuran dan massanya, bukan kepadatannya. Saat partikel dalam pita bergerak turun melalui media kerapatan.

Zona yang mengandung partikel dengan ukuran yang sama terbentuk saat partikel yang mengendap lebih cepat bergerak di depan yang lebih lambat. Semua partikel akhirnya akan membentuk pelet jika disentrifugasi cukup lama karena densitas partikel lebih besar dari densitas gradien.

Sentrifugasi isopycnic

Teknik sentrifugasi dan kegunaannya yang lain yaitu sentrifugasi isopiknik. Dalam pemisahan isopiknik, juga disebut pemisahan apung atau kesetimbangan. Partikel dipisahkan hanya berdasarkan densitasnya. Ukuran partikel hanya mempengaruhi laju pergerakan partikel hingga kerapatannya sama dengan media gradien di sekitarnya.

Massa jenis media gradien harus lebih besar dari massa jenis partikel yang akan dipisahkan. Dengan metode ini, partikel tidak akan pernah mengendap di dasar tabung, tidak peduli berapa lama waktu sentrifugasi.

Saat disentrifugasi, partikel-partikel dengan kerapatan spesifik mengendap hingga mencapai titik di mana kerapatannya sama dengan media gradien (posisi kesetimbangan). Gradien kemudian dikatakan isopiknik dan partikel dipisahkan menurut daya apungnya.

Pemisahan isopiknik dapat bervariasi secara signifikan tergantung pada media gradien yang digunakan karena kepadatan partikel biologis sensitif terhadap tekanan osmotik gradien.

Meskipun gradien kontinu mungkin lebih cocok untuk tujuan analitis, teknik preparatif biasanya menggunakan gradien diskontinu di mana pita partikel pada antarmuka antara lapisan gradien kerapatan. Hal ini membuat pemanenan partikel biologis tertentu (misalnya, limfosit) lebih mudah.

Sekian informasi mengenai teknik sentrifugasi dan kegunaannya. Berbagai alat sentrifus bisa Anda dapatkan di Syaf Unica Indonesia. Kunjungi katalog produk kami untuk mendapatkan berbagai informasi mengenai sentrifus.

WEBSITE || SYAF.CO.ID