Ekstraksi asam nukleat dilakukan untuk berbagai tujuan. Ekstraksi asam nukleat dapat dilakukan dengan berbagai metode. Simak informasi mengenai metode ekstraksi asam nukleat pada artikel berikut ini.

https://www.scientex.com..au

Metode ekstraksi asam nukleat

Prinsip ekstraksi asam nukleat yaitu untuk menjamin integritas struktur utama asam nukleat dan menghilangkan kontaminasi molekul lain.

Saat mengekstraksi, perhatian harus diberikan untuk mempersingkat waktu ekstraksi, mengurangi degradasi asam nukleat oleh faktor kimia dan fisik, gaya geser mekanis dan suhu tinggi, dan mencegah degradasi biologis asam nukleat. Berikut ini adalah beberapa metode ekstraksi asam nukleat:

Metode garam terkonsentrasi

Metode pertama menggunakan kelarutan yang berbeda dari RNP dan DNP dalam larutan elektrolit untuk memisahkan keduanya, metode yang umum adalah mengekstrak lendir DNP yang diperoleh dengan mengekstraksi natrium klorida dengan 1M natrium klorida.

Setelah itu dikocok bersama dengan kloroform yang mengandung sejumlah kecil oktanol untuk membuat emulsifikasi dan sentrifugasi untuk menghilangkan protein. Pada saat ini, gel protein berada di antara fase air dan fase kloroform, sedangkan DNA berada di fase air atas. Garam natrium DNA dapat diendapkan dengan 2 kali volume etanol 95%.

Metode kedua juga dapat menggunakan 0,15 M NaCl dalam mencuci larutan penghancur sel berulang kali untuk menghilangkan RNP. Setelah itu, mengekstrak deoksiribonuklein dengan 1 M NaCl, dan kemudian menghilangkan protein dengan metode kloroform—isoalkohol. Metode ini dapat mengurangi degradasi asam nukleat.

Metode ekstraksi asam nukleat dengan garam terkonsentrasi ketiga yaitu saat mengekstraksi DNA dengan larutan asam klorida encer, menambahkan deterjen dalam jumlah yang sesuai, seperti SDS, dapat membantu memisahkan protein dan DNA.

Dalam proses ekstraksi, untuk menghambat degradasi DNA oleh DNase dalam jaringan, ditambahkan natrium sitrat ke dalam larutan natrium klorida sebagai zat cair untuk ion logam, biasanya 15M NaCl, 0,015M natrium sitrat, dan disebut larutan SSC, untuk mengekstrak DNA.

Metode deterjen anionik

Deterjen seperti SDS atau natrium xylate digunakan untuk mendenaturasi protein, dan DNA dapat diekstraksi langsung dari bahan biologis.

Karena DNA dan protein dalam sel sering digabungkan oleh daya tarik elektrostatik atau ikatan koordinasi, deterjen anionik dapat menghancurkannya. Semacam ikatan valensi, sehingga deterjen anionik sering digunakan untuk mengekstrak DNA.

Metode ekstraksi fenol

Fenol berperan sebagai denaturan protein dan sekaligus menghambat degradasi DNase. Ketika homogenat diperlakukan dengan fenol, ikatan antara protein dan DNA terputus. Permukaan molekul protein mengandung banyak gugus polar yang kompatibel dengan fenol, dan molekul protein larut dalam fenol. Sementara DNA larut dalam fase air.

Setelah sentrifugasi dan pelapisan, keluarkan lapisan air, ulangi operasi beberapa kali, dan kemudian gabungkan fase air yang mengandung DNA, dan gunakan properti asam nukleat yang tidak larut alkohol untuk mengendapkan DNA dengan etanol.

Pada saat ini, DNA adalah zat yang sangat kental, dan dapat diambil dengan membungkusnya dengan bola kaca. Karakteristik dari metode ini adalah untuk menjaga DNA yang diekstraksi dalam keadaan alami.

Metode ekstraksi air

Metode ekstraksi asam nukleat ini memanfaatkan sifat asam nukleat untuk larut dalam air, setelah merusak sel-sel jaringan, menghilangkan RNA dengan larutan rendah garam dan melarutkan endapan dalam air untuk sepenuhnya melarutkan DNA dalam air.

Setelah sentrifugasi, kumpulkan supernatan dan tambahkan natrium klorida padat ke supernatan. Untuk 2,6M, tambahkan 2 kali volume etanol 95%, aduk segera, lalu cuci dengan etanol dan aseton masing-masing 66%, 80%, dan 95%.

Itulah beberapa metode ekstraksi asam nukleat yang perlu Anda ketahui. Alat  untuk ekstraksi asam nukleat secara otomatis dapat Anda beli di sini https://syaf.co.id/product/magxtractor-automatic-nucleic-acid-extractor-pcr-machine-extractor/.

Website || Syaf.co.id