Pemurnian protein merupakan langkah yang dilakukan untuk mengetahui dan mempelajari protein dari struktur yang kompleks. Untuk melakukan pemurnian protein, adan berbagai metode yang bisa dilakukan. Simak informasi mengenai metode pemurnian protein berikut ini.

https://www.sepmag.eu/

Pentingnya melakukan pemurnian protein

Melalui pemurnian protein kita dapat mengkonfirmasi urutan asam amino dari protein. Hal ini berhubungan dengan protein lain dari organisme yang sama dan protein yang sesuai pada organisme lain.

Selain itu, dapat pula mempelajari aktivitas dan fungsi biokimiawinya tanpa gangguan dari molekul lain, sehingga dapat menentukan struktur 3D-nya. Hal paling penting adalah dapat lebih memahami implikasinya pada penyakit manusia.

Metode pemurnian protein

Terdapat empat metode utama yang berbeda dapat dilakukan untuk pemurnian protein. Simak rincian selengkapnya berikut ini:

Kromatografi

Kromatografi merupakan teknik umum yang digunakan untuk mendapatkan sampel protein target. Teknik ini memisahkan zat menurut perbedaan sifatnya. Kromatografi adalah teknik pemurnian yang terkenal dan melibatkan penggunaan kolom yang diisi dengan resin dari protein mana yang diinginkan akan diekstraksi.

Teknik kromatografi bekerja berdasarkan prinsip fase diam dan fase gerak. Fase diam adalah resin dalam kolom, sementara fase gerak adalah pelarut cair. Protein yang diinginkan (atau pengotor, dalam beberapa kasus) mengikat ligan dalam fase diam. Sementara setiap fase gerak menghilangkan pengotor atau mengelusi protein.

Sebuah teknik kromatografi umum adalah kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Jenis teknik kromatografi lainnya dapat digunakan berdasarkan protein yang akan dimurnikan, seperti:

• Kromatografi afinitas
• Kromatografi size-exclusion
• Kromatografi pertukaran ion
• Kromatografi penukar kation
• Kromatografi filtrasi gel
• Kromatografi interaksi hidrofobik

Isolasi

Isolasi adalah metode pemurnian protein yang paling sederhana dari semua strategi pemurnian protein karena protein murni umumnya diperoleh dengan cara:

 

– Ultra-sentrifugasi

Protein dapat diisolasi berdasarkan perbedaan gradien konsentrasi. Sentrifus  membantu memisahkan protein yang lebih besar dari yang lebih kecil. Pelet dan supernatan dari sentrifugasi jenis ini dapat digunakan untuk pemurnian lebih lanjut.

– Fraksinasi

Fraksinasi didasarkan pada perbedaan kelarutan protein. Protein tidak larut dalam larutan konsentrasi garam tinggi dan dengan demikian dapat diisolasi dengan pengenalan garam dalam jumlah yang sangat tinggi.

Pengendapan

Metode pemurnian lainnya adalah presipitasi atau pengendapan garam. Pengendapan garam tidak sepopuler atau umum digunakan saat ini karena tidak selalu menghasilkan protein yang sangat murni.

Proses pemurnian ini secara efektif “menghilangkan garam” atau memusnahkan protein dari campuran. Pengendapan dilakukan dengan memasukkan osmolaritas tinggi menggunakan amonium sulfat sebagai garamnya.

Protein yang berbeda mengendap pada konsentrasi amonium sulfat yang berbeda. Setelah protein diendapkan, garam yang tersisa dalam supernatan dihilangkan dengan dialisis melalui kromatografi filtrasi atau eksklusi gel.

Imunoblotting

Immunoblotting adalah teknik yang banyak digunakan untuk memvisualisasikan protein dan kadang-kadang dilakukan dalam kombinasi dengan kromatografi afinitas. Imunoblotting adalah uji cepat dan sensitif yang terutama digunakan untuk mendeteksi protein.

Imunoblotting untuk protein juga dikenal sebagai western blotting. Dalam western blot yang khas, antibodi digunakan untuk mendeteksi protein yang diinginkan.

Protein pertama-tama dipisahkan berdasarkan ukurannya menggunakan SDS-PAGE (elektroforesis gel natrium dodesil sulfat). Mereka kemudian dipindahkan ke membran berpori dan diblokir untuk mencegah pengikatan antibodi yang tidak spesifik.

Setelah pemblokiran, membran diinkubasi dengan antibodi primer yang spesifik untuk protein yang diinginkan. Kemudian diinkubasi dengan antibodi sekunder yang spesifik terhadap antibodi primer.

Antibodi sekunder biasanya terkonjugasi dengan enzim yang menghasilkan sinyal untuk deteksi. Dengan demikian, hanya protein yang diinginkan yang akan diberi sinyal. Metode ekstraksi protein tersebut juga membantu menunjukkan ekspresi protein.

Itulah informasi mengenai metode pemurnian protein. Semoga informasi yang kami sajikan bisa menambah pengetahuan dan wawasan Anda.

Dapatkan berbagai alat-alat kesehatan, terutama alat untuk memudahkan dalam pemurnian protein dan preparasi sampel di Syaf Unica Indonesia.

 

WEBSITE || SYAF.CO.ID