Teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen adalah teknik pewarnaan diferensial yang awalnya dikembangkan oleh Ziehl dan kemudian dimodifikasi oleh Neelsen, oleh karena itu dinamakan pewarnaan Ziehl-Neelsen.

https://mobile.labmedica.com/

Apa itu teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen?

Pada pewarnaan Ziehl-Neelsen, Neelsen menggunakan carbol-fuschin dari percobaan Ziehl, dengan panas dan menambahkan zat penghilang warna menggunakan asam-alkohol dan counterstain menggunakan pewarna biru metilen, sehingga mengembangkan Teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen.

Penggunaan asam-alkohol dalam teknik membuatnya diberi nama Pewarnaan Cepat Asam dan penerapan panas dalam teknik tersebut memberinya nama metode panas pewarnaan Cepat Asam yang merupakan nama sinonim untuk teknik Pewarnaan Ziehl-Neelsen.

Teknik ini digunakan pada mikroorganisme yang tidak mudah diwarnai dengan pewarnaan dasar seperti pewarnaan Negatif atau pewarnaan Gram. Salah satu mikroorganisme paling kompleks yang memerlukan perlakuan keras terhadap senyawa Ziehl-Neelsen adalah Mycobacterium spp.

Mycobacterium, Actinomycetes, Norcadia, Isospora, Cryptosporidium, dan beberapa jamur mengandung dinding sel tebal yang terdiri dari kompleks lipoidal yang dikenal sebagai asam mikolat.

Asam mikolat sulit untuk diwarnai dan oleh karena itu pewarnaan sederhana seperti pewarnaan gram tidak dapat menembus dinding sel tebal organisme ini.

Mereka membutuhkan perawatan yang lebih keras untuk memungkinkan penetrasi noda untuk identifikasi dan pemeriksaan dan karenanya penggunaan Ziehl-Neelsen atau metode panas pewarnaan tahan asam.

Prinsip teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen

Pewarnaan Ziehl-Neelsen menggunakan senyawa dasar fuchsin dan fenol untuk mewarnai dinding sel spesies Mycobacterium.

Mycobacterium tidak mudah mengikat noda sederhana, dan oleh karena itu penggunaan panas bersama dengan karbol-fuschin dan fenol memungkinkan penetrasi melalui dinding sel bakteri untuk visualisasi.

Dinding sel Mycobacterium mengandung kadar lipid tinggi yang terdiri dari asam mikolat pada dinding selnya sehingga membuatnya seperti lilin, hidrofobik, dan kedap air. Ini adalah asam-hidroksikarboksilat yang terdiri dari 90 atom karbon yang menentukan ketahanan asam bakteri.

Penggunaan Carbol-fuschin yang bersifat basa mengikat kuat komponen negatif bakteri yang meliputi asam mikolat dan dinding sel lipid. penambahan alkohol asam bersama dengan penerapan panas membentuk kompleks kuat yang tidak dapat dengan mudah dicuci dengan pelarut.

Basil tahan asam mengambil warna merah dari pewarna utama, karbol-fuschin. Sedangkan bakteri yang tidak tahan asam dengan mudah menghilangkan warna pada penambahan asam-alkohol dan mengambil pewarna counterstain dari metilen biru dan tampak biru.

Teknik ini telah digunakan dalam identifikasi Mycobacterium tuberculosis dan Mycobacterium leprae.

 

Reagen yang digunakan dalam Pewarnaan Ziehl-Neelsen

Dalam teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen, digunakan beberapa reagen yaitu:

• Karbol-Fuschin (Pewarna primer)
• 20% asam sulfat atau asam-alkohol (Decolorizer)
• Pewarna Metilen Biru (pewarna tandingan) atau hijau perunggu

Reagen kit Ziehl-Neelsen yaitu CDH Ziehl Neelsen Acid Fast Stains Kit tersedia di Syaf Unica Indonesia.

Hasil dan interpretasi hasil pewarnaan Ziehl-Neelsen

Visualisasi hasil pewarnaan bakteri menggunakan pewarnaan Ziehl-Neelsen yaitu sebagai berikut:

• Bakteri tahan asam mempertahankan pewarna utama, karbol-fuschin, dan noda merah muda.
• Bakteri lemak non-asam akan mengambil pewarna biru metilen sehingga tampak biru.

Aplikasi teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen

Pewarnaan Ziehl-Neelsen digunakan untuk berbagai aplikasi, diantaranya yaitu sebagai berikut:

• Digunakan untuk identifikasi dan pemeriksaan spesies Mycobacterium.
• Digunakan untuk membedakan antara basil tahan asam dan tidak tahan asam.
• Digunakan untuk identifikasi berbagai spesies jamur misalnya Cryptosporidium.

Itulah sedikit informasi mengenai teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen. Kit pewarnaan Ziehl-Neelsen tersedia di Syaf untuk penelitian yang lebih mudah.

Website || Syaf.co.id