Tujuan utama prosedur Acid-fast stain ini adalah untuk membedakan bakteri menjadi kelompok tahan asam dan tidak tahan asam.

https://www.scienceprofonline.com/

Apa itu acid-fast stain?

Acid-fast stain (pewarnaan tahan asam) adalah teknik pewarnaan diferensial yang pertama kali dikembangkan oleh Ziehl dan kemudian dimodifikasi oleh Neelsen. Jadi metode ini disebut juga teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen.

Neelsen pada tahun 1883 menggunakan karbol-fuchsin Ziehl dan dipanaskan kemudian dihilangkan warnanya dengan alkohol asam, dan diwarnai dengan metilen biru. Dengan demikian teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen dikembangkan.

Metode ini digunakan untuk mikroorganisme yang tidak diwarnai dengan pewarnaan sederhana atau pewarnaan Gram, khususnya anggota genus Mycobacterium, yang resisten dan hanya dapat dilihat dengan pewarnaan tahan asam.

Prinsip acid-fast stain

Ketika apusan diwarnai dengan carbol fuchsin, itu melarutkan bahan lipoidal yang ada di dinding sel Mycobacterium tetapi dengan penerapan panas, carbol fuchsin lebih jauh menembus dinding lipoidal dan masuk ke dalam sitoplasma.

Kemudian setelah semua sel muncul merah. Apusan dihilangkan warnanya (dekolorisasi) dengan zat penghilang warna (3% HCL dalam alkohol 95%) tetapi sel tahan asam menjadi resisten karena adanya sejumlah besar bahan lipoidal di dinding selnya yang mencegah penetrasi larutan penghilang warna.

Organisme tidak tahan asam kekurangan bahan lipoidal di dinding sel mereka karena mereka mudah dihilangkan warna, meninggalkan sel-sel tidak berwarna. Kemudian apusan diwarnai dengan counterstain, metilen biru.

Hanya sel yang tidak berwarna yang menyerap counterstain untuk mengambil warnanya dan tampak biru sementara sel tahan asam mempertahankan warna merah.

Prosedur acid-fast stain

Prosedur untuk melakukan pewarnaan tahan asam adalah sebagai berikut:

• Siapkan apusan bakteri pada slide yang bersih dan bebas lemak, dengan teknik steril.
• Biarkan noda mengering di udara dan kemudian panaskan.

Fiksasi alkohol: Ini direkomendasikan jika apusan belum dibuat dari sputum yang diberi natrium hipoklorit (pemutih) dan tidak akan langsung diwarnai. M. tuberculosis dibunuh oleh pemutih dan selama proses pewarnaan. Fiksasi panas dari dahak yang tidak diobati tidak akan membunuh M. tuberculosis sedangkan fiksasi alkohol bersifat bakterisida.

• Tutup apusan dengan pewarna karbol fuchsin.
• Panaskan noda sampai uapnya mulai naik (yaitu sekitar 60 C). Jangan terlalu panas. Biarkan noda yang dipanaskan tetap berada di slide selama 5 menit.

Memanaskan noda: Harus sangat berhati-hati saat memanaskan karbol fuchsin terutama jika pewarnaan dilakukan di atas baki atau wadah lain yang berisi bahan kimia yang sangat mudah menguap dari pewarnaan sebelumnya. Hanya sedikit api yang harus diterapkan di bawah slide menggunakan swab yang dinyalakan yang sebelumnya dibasahi dengan beberapa tetes alkohol asam atau 70% v/v etanol atau metanol. Jangan gunakan swab besar yang direndam etanol karena ini berisiko kebakaran.

• Bersihkan noda dengan air bersih.

Catatan: prosedur Acid-fast stain bila air kran tidak bersih, bilas apusan dengan air saring atau air hujan bersih yang direbus.

• Tutup apusan dengan alkohol asam 3% v/v selama 5 menit atau sampai apusan cukup hilang warnanya, yaitu merah muda pucat.

Perhatian: Alkohol asam mudah terbakar, oleh karena itu gunakan dengan hati-hati jauh dari api terbuka.

• Cuci dengan baik dengan air bersih.
• Tutup apusan dengan pewarna hijau perunggu selama 1-2 menit, gunakan waktu yang lebih lama jika apusan tipis.
• Bersihkan noda dengan air bersih.
• Lap bagian belakang slide hingga bersih, dan letakkan di rak pengeringan agar apusan mengering di udara (jangan sampai kering).
• Periksa apusan secara mikroskopis, dengan menggunakan objektif minyak imersi 100 X.

Itulah informasi seputar prosedur acid-fast stain. CDH Ziehl Neelsen Acid Fast Stains Kit bisa dibeli di Syaf.

Website || Syaf.co.id