Real-time thermocycler digunakan untuk melakukan reaksi polimerasi berantai atau polymerase chain reaction di laboratorium. Simak informasi mengenai cara kerja real-time thermocycler berikut ini.

https://www.litbang.kemkes.go..id

Apa itu real-time thermocycler?

Real-time thermocycler merupakan peralatan biologi molekuler yang banyak digunakan di laboratorium khusus ini. Perangkat ini melakukan reaksi berantai polimerase secara real time (qPCR), artinya mereka memungkinkan melakukan PCR dan pada saat yang sama mereka benar-benar dapat mengukur produk amplifikasi.

Real-time PCR adalah teknik untuk menentukan jumlah DNA atau RNA dalam berbagai macam pengujian yang melibatkan ekspresi gen, deteksi patogen dan transgenik, genotipe, penentuan viral load, dan lain-lain.

Teknik ini memiliki fitur penting seperti spesifisitas tinggi, jangkauan deteksi yang luas, dan kecepatan dalam tampilan produk.

Bagaimana cara kerja real-time thermocycler?

Sebuah real-time thermocycler memiliki kemampuan untuk mempengaruhi setiap sampel dengan berkas cahaya tertentu (pada panjang gelombang tertentu) dan untuk mendeteksi fluoresensi yang dipancarkan oleh fluorochrome tereksitasi.

Peralatan ini dapat dengan cepat memanaskan dan mendinginkan sampel, sehingga dapat dilakukan langkah-langkah reaksi berantai polimerase, proses ini terdiri dari serangkaian perubahan suhu yang diulang 25-40 kali.

Dengan kata lain, peralatan ini secara otomatis dan siklis melakukan perubahan suhu yang diperlukan untuk amplifikasi rantai asam deoksiribonukleat (DNA); dari enzim termostabil, dan penggunaan zat berlabel fluorofor yang memungkinkan pengukuran laju pembentukan satu atau lebih produk tertentu.

Inilah sebabnya mengapa thermocycler memungkinkan untuk mendeteksi dan mengukur urutan asam nukleat spesifik secara simultan melalui molekul fluoresen yang ada dalam reaksi, karena peningkatan fluoresensi berbanding lurus dengan peningkatan jumlah molekul DNA yang diperkuat dalam reaksi.

Bagaimana real-time thermocycler dirancang?

Real-time thermocycler dirancang untuk menghasilkan suhu yang stabil, kinerja optik yang luar biasa, akurasi dan akurasi. Perangkat ini banyak digunakan di berbagai bidang ilmu pengetahuan seperti penelitian ilmiah, deteksi dan diagnosis klinis, aplikasi forensik dan uji jaminan kualitas.

Perangkat ini memiliki sistem optik gabungan yang kuat, yang memantau sinyal dari fluorofor yang digunakan untuk mendeteksi produk yang diperkuat untuk memantau kemajuan reaksi amplifikasi, serta perangkat keras dan perangkat lunak untuk pengambilan dan analisis data, masing-masing.

Sistem fluorometrik dari thermocycler waktu-nyata terdiri dari sumber energi untuk fluorofor yang menarik (pada panjang gelombang eksitasi tertentu) dan sistem deteksi, yang memungkinkan pemantauan sinyal yang dipancarkan (pada panjang gelombang emisi).

Cara kerja real-time thermocycler dalam proses reaksi, fluoresensi meningkat ketika produk diperkuat, proses amplifikasi dan deteksi digabungkan dalam satu tahap.

Saat ini ada berbagai jenis real-time thermocycler, yang perbedaan utamanya adalah sumber energi, yang mereka gunakan untuk eksitasi. Biasanya ada tiga jenis sumber, yaitu lampu, dioda pemancar cahaya (LED), dan laser.

Aplikasi Real-Time PCR/qPCR Assay

Uji Real-Time PCR/qPCR telah menjadi alat pilihan untuk penentuan dan kuantisasi asam nukleat yang cepat dan sensitif dalam berbagai sampel biologis, dengan beragam aplikasi seperti analisis ekspresi gen, deteksi organisme yang dimodifikasi secara genetik dalam makanan, dan fenotip kanker.

Di laboratorium penelitian, uji qPCR banyak digunakan untuk pengukuran kuantitatif jumlah salinan gen (dosis gen) dalam garis sel yang diubah atau keberadaan gen mutan.

Dalam kombinasi dengan PCR transkripsi balik (RT-PCR), uji qPCR dapat digunakan untuk mengukur secara tepat perubahan ekspresi gen, misalnya, peningkatan atau penurunan ekspresi sebagai respons terhadap kondisi lingkungan atau perlakuan obat yang berbeda, dengan mengukur perubahan dalam sel tingkat mRNA.

Sekian informasi mengenai cara kerja real-time thermocycler. MyGo Pro Real-time PCR Instrument bisa Anda beli di Syaf Unica Indonesia.